TRIzol的主要成分是苯酚。苯酚的主要作用是裂解細(xì)胞，使細(xì)胞中的蛋白，核酸物質(zhì)解聚得到釋放。苯酚雖可有效地變性蛋白質(zhì)，但不能完全抑制RNA酶活性，因此TRIzol中還加入了8－羥基喹啉、異硫氰酸胍、β-巰基乙醇等來抑制內(nèi)源和外源RNase（RNA酶）。

使用方法：

   該法從細(xì)菌中提取RNA——用勻漿器將組織磨碎，加入TRIzol處理組織。5分鐘后加入氯仿，以每分鐘12000轉(zhuǎn)離心5分鐘，樣品即分成水樣層、中間層和有機(jī)層。

   ※RNA存在于水樣層中，收集水樣層后可以通過異丙醇沉淀RNA來還原。

   ※在除去水樣層后，有機(jī)層中的DNA和蛋白質(zhì)也能相繼以沉淀的方式還原：乙醇能使中間層的DNA沉淀析出，在有機(jī)層中加入異丙醇能沉淀出蛋白質(zhì)。

   每100ml TRIzol可以抽提100個六孔板中的樣品或100個50-80mg的組織樣品。無論樣品是人、動物、植物還是細(xì)菌組織，該方法對少量的組織（50-100mg)和細(xì)胞（約五百萬個）及大量的組織（≥1g）和細(xì)胞（超過一千萬個）均有較好的分離效果。

   每一百萬細(xì)胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA，每毫克組織用TRIzol抽提可得1-10微克RNA（產(chǎn)量因細(xì)胞和組織不同而異）。

   TRIzol操作上的簡便性允許其同時處理多個樣品，所有的操作可以在一小時內(nèi)完成。

   TRIzol抽提的總RNA能夠避免DNA和蛋白質(zhì)的污染，故而能夠作RNA 印跡分析、斑點雜交、poly(A)+ 選擇、體外翻譯、RNA酶保護(hù)分析和單分子克?。≒CR）。

   ※如果是用于PCR，當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時，建議用級聯(lián)擴(kuò)大的DNase I(Cat. No. 18068）來處理抽提的總RNA。

   ※TRIzol試劑能促進(jìn)不同種屬、不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟抽提的RNA經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見許多介于7kb和15kb之間的不連續(xù)的高分子量條帶（mRNA和hnRNA成分），兩條優(yōu)勢核糖體RNA條帶位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA,5S）。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時，其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA時宜-70℃沉淀過夜。

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